Разработка методики ВЭЖХ-анализа разных форм препарата на основе экстракта маклеи сердцевидной
- Authors: 1, 1
-
Affiliations:
- Самарский национальный исследовательский университет имени академика С.П. Королева
- Issue: Vol 1 (2024)
- Pages: 277-278
- Section: ЧАСТЬ I. Медицина и фармация
- URL: https://vietnamjournal.ru/osnk-sr2024/article/view/632751
- ID: 632751
Cite item
Full Text
Abstract
Обоснование. В фармакопейную статью, определяющую порядок контроля препарата на основе настойки маклеи, заложен только фотометрический метод количественного анализа [1]. С целью обеспечения качества при производстве всех форм данного фармакологического препарата предлагается разработать методику анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Цель — разработать методику ВЭЖХ-анализа таблетированной и жидкой формы препарата на основе экстракта маклеи сердцевидной.
Методы. Объектом исследования являлся препарат Сангвиритрин в форме спиртовой настойки и таблетированной форме, приобретенные в аптечной сети. В качестве подвижной фазы (ПФ) использовался раствор додецилсульфата натрия (ДСН) и ацетонитрил [2]; 0,01М фосфатный буфер и метанол [3]; 0,01М ацетат аммония [4]. Работу проводили на ВЭЖХ-системе AZURA Knauer, колонка Phenomenex 250 × 4,6 мм, С18 5 мкм. Детектирование осуществляли спектрофотометрическим детектором при λ = 270 нм, диодно-матричным детектором в диапазоне длин волн с 200 до 700 нм.
Результаты. Элюирование компонентов на хроматограмме получено при 60 % 0,0005 М ДСН рН = 2,8 и 40 % ацетонитрила, изократический режим элюирования, рН~3. Аналогичный анализ с использованием диодно-матричного детектора показал наложение пиков нескольких веществ в области пиков сангвинарина и хелеритрина. В препарате выявлено содержание гомологов сангвинарина и хелеритрина, поэтому дальнейшее исследование направленно на их разделение. Классический состав ПФ в виде 0,01М фосфатного буфера и ацетонитрила, а также ПФ из ацетонитрила, метанола, фосфатного буфера в соотношении 20 : 40 : 40 позволили получить на хроматограмме 4 пика. Полного разделения компонентов в этих случаях не произошло.
Далее было решено скомбинировать в водной части подвижной фазы додецилсульфат натрия и фосфатный буфер для реализации всех способов взаимодействия сорбат-сорбент в одном анализе.
Оптимальные результаты были получены при разделении в изократическом режиме элюирования с ПФ 60 % 0,0005М ДСН 0,01М фосфатный буфер рН = 2,8 и 40 % ацетонитрила (рис. 1). Пик со временем удерживания tR = 22,8 мин соответствует сангвинарину, пик с tR = 37,9 мин — хелеритрину. Данный метод позволяет получить наиболее полный компонентный состав.
Рис. 1. ВЭЖХ-анализ с комбинированной подвижной фазой
Следующим этапом опробована подвижная фаза: 60 % 0,01М ацетат аммония рН~3 и 40 % ацетонитрила, изократический режим (рис. 2).
Рис. 2. ВЭЖХ-анализ с подвижной фазой на основе ацетата аммония
Удалось получить два пика на хроматограмме, соответствующих сангвинарину tR = 9,6 мин и хелеритрину tR = 12,68 мин, время анализа составляет 15 минут. Данный метод является оптимальным для проведения больших серий анализов, где необходимо оценивать суммарное содержание действующих веществ и их производных, так как является наиболее быстрым из всех опробованных.
Пробоподготовка для формы препарата в виде настойки осуществлялась путем разбавления препарата до корректных значений площадей пиков аналитов. Для таблетированной формы было опробовано четыре метода пробоподготовки: растворение с предварительным соскабливанием оболочки с помощью стеклянной палочки, растворение с помощью перемешивающего устройства Vortex, растворение с использованием ультразвука в течение 3 и 10 минут. В приведенных методах расчетная концентрация растворов составляет 0,5 мг/мл.
Чувствительность методики определяли путем разбавления растворов препарата и расчета концентрации действующих компонентов. Установлено, что минимальная концентрация аналитов, определяемая данной методикой, соответствует 0,65 мкг/мл для жидкой и таблетированной формы, растворенной с воздействием ультразвука в течение 10 минут, соответственно, не происходит потери аналита. В остальных методах пробоподготовки наблюдаются незначительные потери действующих веществ.
Выводы. Получены два оптимальных метода анализа: для получения подробного компонентного состава и для получения больших серий анализов. Выбранный метод количественного анализа является воспроизводимым, чувствительность методики составляет 0,65 мкг/мл суммарно содержания алкалоидов.
Keywords
Full Text
Обоснование. В фармакопейную статью, определяющую порядок контроля препарата на основе настойки маклеи, заложен только фотометрический метод количественного анализа [1]. С целью обеспечения качества при производстве всех форм данного фармакологического препарата предлагается разработать методику анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Цель — разработать методику ВЭЖХ-анализа таблетированной и жидкой формы препарата на основе экстракта маклеи сердцевидной.
Методы. Объектом исследования являлся препарат Сангвиритрин в форме спиртовой настойки и таблетированной форме, приобретенные в аптечной сети. В качестве подвижной фазы (ПФ) использовался раствор додецилсульфата натрия (ДСН) и ацетонитрил [2]; 0,01М фосфатный буфер и метанол [3]; 0,01М ацетат аммония [4]. Работу проводили на ВЭЖХ-системе AZURA Knauer, колонка Phenomenex 250 × 4,6 мм, С18 5 мкм. Детектирование осуществляли спектрофотометрическим детектором при λ = 270 нм, диодно-матричным детектором в диапазоне длин волн с 200 до 700 нм.
Результаты. Элюирование компонентов на хроматограмме получено при 60 % 0,0005 М ДСН рН = 2,8 и 40 % ацетонитрила, изократический режим элюирования, рН~3. Аналогичный анализ с использованием диодно-матричного детектора показал наложение пиков нескольких веществ в области пиков сангвинарина и хелеритрина. В препарате выявлено содержание гомологов сангвинарина и хелеритрина, поэтому дальнейшее исследование направленно на их разделение. Классический состав ПФ в виде 0,01М фосфатного буфера и ацетонитрила, а также ПФ из ацетонитрила, метанола, фосфатного буфера в соотношении 20 : 40 : 40 позволили получить на хроматограмме 4 пика. Полного разделения компонентов в этих случаях не произошло.
Далее было решено скомбинировать в водной части подвижной фазы додецилсульфат натрия и фосфатный буфер для реализации всех способов взаимодействия сорбат-сорбент в одном анализе.
Оптимальные результаты были получены при разделении в изократическом режиме элюирования с ПФ 60 % 0,0005М ДСН 0,01М фосфатный буфер рН = 2,8 и 40 % ацетонитрила (рис. 1). Пик со временем удерживания tR = 22,8 мин соответствует сангвинарину, пик с tR = 37,9 мин — хелеритрину. Данный метод позволяет получить наиболее полный компонентный состав.
Рис. 1. ВЭЖХ-анализ с комбинированной подвижной фазой
Следующим этапом опробована подвижная фаза: 60 % 0,01М ацетат аммония рН~3 и 40 % ацетонитрила, изократический режим (рис. 2).
Рис. 2. ВЭЖХ-анализ с подвижной фазой на основе ацетата аммония
Удалось получить два пика на хроматограмме, соответствующих сангвинарину tR = 9,6 мин и хелеритрину tR = 12,68 мин, время анализа составляет 15 минут. Данный метод является оптимальным для проведения больших серий анализов, где необходимо оценивать суммарное содержание действующих веществ и их производных, так как является наиболее быстрым из всех опробованных.
Пробоподготовка для формы препарата в виде настойки осуществлялась путем разбавления препарата до корректных значений площадей пиков аналитов. Для таблетированной формы было опробовано четыре метода пробоподготовки: растворение с предварительным соскабливанием оболочки с помощью стеклянной палочки, растворение с помощью перемешивающего устройства Vortex, растворение с использованием ультразвука в течение 3 и 10 минут. В приведенных методах расчетная концентрация растворов составляет 0,5 мг/мл.
Чувствительность методики определяли путем разбавления растворов препарата и расчета концентрации действующих компонентов. Установлено, что минимальная концентрация аналитов, определяемая данной методикой, соответствует 0,65 мкг/мл для жидкой и таблетированной формы, растворенной с воздействием ультразвука в течение 10 минут, соответственно, не происходит потери аналита. В остальных методах пробоподготовки наблюдаются незначительные потери действующих веществ.
Выводы. Получены два оптимальных метода анализа: для получения подробного компонентного состава и для получения больших серий анализов. Выбранный метод количественного анализа является воспроизводимым, чувствительность методики составляет 0,65 мкг/мл суммарно содержания алкалоидов.
About the authors
Самарский национальный исследовательский университет имени академика С.П. Королева
Author for correspondence.
Email: liyasul2002@mail.ru
студентка, группа 4425-280302D, направление «Наноинженерия»
Russian Federation, СамараСамарский национальный исследовательский университет имени академика С.П. Королева
Email: christine03@yandex.ru
студентка, группа 4425-280302D, направление «Наноинженерия»
Russian Federation, СамараReferences
- ФС.42-2666-89 Фармакопейная статья. Министерство здравоохранения Российской Федерации. 5 с.
- Моисеев Д.В. Определение алкалоидов в траве чистотела большого и листьях маклеи сердцевидной методом ВЭЖХ // Бутлеровские сообщения. 2013. Т. 36, № 11. С. 134–138. EDN: RVKCFT
- Сычев С.Н. Разработка методов и средств контроля состава смесей органических соединений на основе диполь-полевой теории удерживания высокоэффективной жидкостной хроматографии: дис. … д-ра техн. наук: защищена. Орел, 2005. 334 с.
- Zhao W.-J., Chen X.-Y., Liu Y.-Q., et al. Liquid chromatographic separation of alkaloids in herbal medicines: Current status and perspectives // J Sep Sci. 2020. Vol. 43, N 9-10 . P. 1755–1772. doi: 10.1002/jssc.202000081
Supplementary files
