Комплекс TREX-2-ORC D. melanogaster участвует в ядерном экспорте МРНК гистонов

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Белковый комплекс TREX-2-ORC D. melanogaster необходим для экспорта большей части синтезирующихся молекул поли(А)-содержащей мРНК из ядра в цитоплазму через ядерные поры. Однако, роль данного комплекса в экспорте других групп РНК остается неизвестным. Нами показано, что TREX-2-ORC участвует в ядерном экспорте мРНК гистонов: он ассоциирован с мРНП частицами гистонов, связывается с мРНК гистона H3 в 3’-концевой части кодирующей области и участвует в экспорте мРНК гистонов из ядра в цитоплазму.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

М. М. Куршакова

Институт Молекулярной Биологии им. В. А. Энгельгардта Российской Академии Наук

Автор, ответственный за переписку.
Email: kursha@mail.ru
Россия, Москва

Ю. А. Якушева

Институт Молекулярной Биологии им. В. А. Энгельгардта Российской Академии Наук

Email: kursha@mail.ru
Россия, Москва

С. Г. Георгиева

Институт Молекулярной Биологии им. В. А. Энгельгардта Российской Академии Наук

Email: kursha@mail.ru

академик РАН

Россия, Москва

Список литературы

  1. Fischer T., Strasser K., Racz A., et al. // The EMBO journal. 2002. V. 21. № 21. P. 5843–5852.
  2. Rodríguez-Navarro S., Fischer T., Luo M. J., et al. // Cell. 2004. V. 116. № 1. P. 75–86.
  3. Jani D., Lutz S., Hurt E., et al. // Nucleic acids research. 2012. V. 40. № 10. P. 4562–4573.
  4. Jani D., Lutz S., Marshall N. J., et al. // Molecular cell. 2009. V. 33. № 6. P. 727–737.
  5. Ellisdon A. M., Dimitrova L., Hurt E. and Stewart M. // Nature structural & molecular biology. 2012. V. 19. № 3. P. 328–336.
  6. Dimitrova L., Valkov E., Aibara S., et al. // Structure. 2015. V. 23. № 7. P. 1246–1257.
  7. Jani D., Valkov E., Stewart M. // Nucleic acids research. 2014. V. 42. № 10. P. 6686–6697.
  8. Kurshakova M. M., Krasnov A. N., Kopytova D. V., et al. // The EMBO journal. 2007. V. 26. № 24. P. 4956–4965.
  9. Kopytova D., Popova Vol., Kurshakova M., et al. // Nucleic acids research. 2016. V. 44. № 10. P. 4920–4933.
  10. Bleichert F. // Current opinions in structural biology. 2019. V. 59. P. 195–204.
  11. Popova Vol., Brechalov A. // Nonreplicative functions of the origin recognition complex. 2018. V. 9. P. 460–473.
  12. Duronio R. J., Marzluff W. F. // RNA biology. 2017. V. 14. № 6. P. 726–738.
  13. Sun Y., Zhang Y., Aik W. S., et al. // Science. 2020b. V. 367. P. 700–703.
  14. Huang Y., Gattoni R., Stevenin J. and Steitz J. A. // Molecular Cell. 2003. V. 11. P. 837–843.
  15. Erkmann J. A., Sanchez R., Treichel N., et al. // RNA. 2005. V. 11. P. 45–58.
  16. Popova Vol.V., Georgieva S. G., Kopytova D. V. // Biochemistry and molecular biology journal. 2016. V. 2. P. 2–14.
  17. Куршакова М. М., Копытова Д. В., Георгиева С. Г. // Доклады АН. 2021. Т. 496. С. 66–69.
  18. Huang Y., Steitz J. A. // Molecular Cell. 2001. V. 7. P. 899–905.
  19. Fan J., Wang K., Du X., et al. // The EMBO Journal. 2019.
  20. Kopytova D. V., Orlova A. V., Krasnov A. N., et al. // Genes and Development. 2009. V. 24. P. 86–96.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис.1. TREX-2-ORC ассоциирован с мРНК гистонов. (а) Результаты иммуноосаждения мРНП частиц генов H2A, H3 и β-tubulin антителами к субъединицам TREX-2-ORC, в качестве отрицательного контроля использованы IgG. Результаты представлены в процентах от исходного материала. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение, для сравнения контроля и эксперимента использовался t-критерий Стьюдента. (*) указывает на статистическую значимость с p-value <0.05, (**) указывает на статистическую значимость с p-value < 0.01. (б) Вестерн-блот анализ сосаждения H3 мРНП частиц с биотинилированным антисмысловым РНК-зондом к мРНК гистона H3 с использованием антител к Xmas-2, PCID2, ENY2, Orc3, Orc6, CPSF100, CPSF73. В отрицательном контроле (K-) использован РНК-зонд с антисмысловой последовательностью к РНК белка YFP. (в) Вестерн-блот анализ соосаждения белков с биотинилированными смысловыми РНК-зондами к последовательностям мРНК гистона H3: полноразмерной (H3), CDS1, CDS2, 3’UTR, с использованием антител к Xmas-2, PCID2, ENY2, Orc3, Orc6, CPSF100, CPSF73. В отрицательном контроле (K-) использован РНК-зонд с антисмысловой последовательностью к РНК YFP.

Скачать (469KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Эффект нокдауна субъединиц TREX-2-ORC на экспорт мРНК гистонов. (а) Вестер-блот анализ уровней экспрессии белков при РНК-интереференциях Xmas-2, Orc3 в S2 клетках при помощи соответствующих антител. В качестве выравнивающего контроля использовано окрашивание антителами к ламину Dm0. (б) Результаты им- муноосаждения мРНП частиц гистонов при РНК-интереференции Xmas-2 c антителами к субъединицам TREX-2- ORC, в качестве отрицательного контроля использованы IgG. Результаты представлены в процентах от исходного материала. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение, для сравнения контроля и экспе- римента использовался t-критерий Стьюдента. (*) указывает на статистическую значимость c p-value < 0.05, (**) указывает на статистическую значимость c p-value<0.01. (в) Вестерн-блот анализ РНК-интереференций Xmas-2, Orc3, NXF1 с использованием антител к одноименным белкам. В качестве выравнивающего контроля использова- но окрашивание антителами к ламину Dm0. (г) FISH-гибридизация с антисмысловой РНК-пробой к H3 мРНК при РНК-интереференциях (РНКи) Xmas-2, Orc3, NXF1 в S2 клетках. В качестве отрицательного контроля (Контроль) проведена РНК-интерференция c дцРНК белка GFP. (д) Доля S2-клеток с нарушениями экспорта H3 мРНК при нокдаунах Xmas-2, Orc3, NXF1 или GFP (Контроль).

Скачать (683KB)
Метаданные

© Российская академия наук, 2024